क्लोरोफिल एक हरा रंगद्रव्य है जो उच्च पौधों और अन्य सभी प्रकाश संश्लेषक जीवों में पाया जाता है। क्लोरोफिल ए और क्लोरोफिल बी इथेनॉल, ईथर और एसीटोन और अन्य सॉल्वैंट्स में घुलनशील हैं, पानी और पेट्रोलियम ईथर में अघुलनशील हैं, इसलिए क्लोरोफिल निकालने के लिए एसीटोन, मेथनॉल, इथेनॉल, एथिल एसीटेट जैसे ध्रुवीय सॉल्वैंट्स का उपयोग कर सकते हैं।
क्लोरोफिल निष्कर्षण प्रक्रिया:
क्लोरोफिल निष्कर्षण एक अर्ध-अंधेरे कमरे में 25 डिग्री सेल्सियस पर तैयार किया जाता है। निष्कर्षण चरण इस प्रकार हैं:
(1) 1000 ग्राम ताजे हरे पत्ते लें और उन्हें वेक्स्लर में पीस लें।
(2) कुचली हुई 1000 ग्राम हरी पत्तियों को निकालने के लिए थोड़ी मात्रा में कैल्शियम कार्बोनेट (तापमान 20 डिग्री) के साथ एसीटोन में डालें, जब तक कि पत्ती के टुकड़े छानने और सफाई के बाद रंगहीन न हो जाएं।
(3) फ़िल्टर किए गए एसीटोन के अर्क को 1 लीटर पेट्रोलियम ईथर और 100 एमएल एसीटोन वाले फ़नल में डालें, और फिर धीरे से घुमाएँ, आसुत जल को स्तरीकृत होने तक मिलाएँ। पानी की परत में अधिकांश एसीटोन और पानी में घुलनशील अशुद्धियों को छोड़ दिया जाता है, जिससे केवल पेट्रोलियम ईथर का घोल बचता है।
(4) पेट्रोलियम ईथर के घोल को फिर से आसुत जल से शुद्ध करने के बाद, इसे 2 0 0 मिलीलीटर 80 प्रतिशत मेथनॉल घोल से 5 बार से अधिक साफ किया जाता है जिसमें पेट्रोलियम ईथर और 0.01 ग्राम ऑक्सालिक एसिड होता है, और अंत में पीला-हरा निलंबन प्राप्त होता है। .
(5) निलंबन को निर्जल सोडियम सल्फेट से सुखाएं, और इसे 3 सेमी मोटे सुक्रोज पाउडर से बने कॉलम में घुसपैठ करें। फिर अवक्षेपित पिगमेंट को साफ करें ताकि कैरोटेनॉयड्स निकल जाएं और उनमें केवल प्राकृतिक क्लोरोफिल हो।
(6) प्राकृतिक क्लोरोफिल युक्त सुक्रोज कॉलम को दो परतों में विभाजित किया गया है, हरे रंग की परत में 4-10मिमी क्लोरोफिल बी परत है, दूसरी नीली परत 2-6मिमी क्लोरोफिल ए परत है।
(7) नीली परत (नीली परत का लगभग आधा) के बीच में स्थित भाग को ईथर में डाल दिया जाता है, निलंबन को छानकर निकाला जाता है, आसुत जल से साफ किया जाता है, सोडियम सल्फेट से सुखाया जाता है, और क्लोरोफिल प्राप्त करने के लिए बर्तनों से छान लिया जाता है। ए।
(8) (6) में हरी परत के मध्य भाग को हटा दें, और क्लोरोफिल बी ईथर का घोल बनाने के लिए इसे छानने और धोने के लिए जल्दी से ईथर में डाल दें।
निष्कर्षण के दौरान कैसे अलग करें?
क्रोमैटोग्राफी कार्बनिक यौगिकों के पृथक्करण, शुद्धिकरण और पहचान के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका है, विशेष रूप से सूक्ष्म विश्लेषण में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। फलों और सब्जियों में मुख्य रूप से वसा में घुलनशील कैरोटीन, ल्यूटिन, क्लोरोफिल और पानी में घुलनशील एंथोसायनिन शामिल हैं। निष्कर्षण प्रयोगों में, हम इसी तरह के गलत पानी में घुलनशील एंथोसायनिन फ़िल्टरिंग के सिद्धांत का उपयोग कर सकते हैं, जो बदले में बीटा-कैरोटीन, ल्यूटिन को अलग करने के लिए पतली परत क्रोमैटोग्राफी, कॉलम क्रोमैटोग्राफी, उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) का उपयोग कर सकते हैं। और क्लोरोफिल, बदले में तीन प्रकार के वर्णक की ध्रुवीयता के कारण कमजोर हो गया, उचित रूप से एकल कार्बनिक विलायक या मिश्रित विलायक के विभिन्न अनुपात को विस्तार एजेंट और रेफरेंस एजेंट के रूप में चुना जा सकता है, इष्टतम अलगाव की स्थिति निर्धारित की गई थी।
